來源:疾病預防控制局
聯防聯控機制綜發〔2020〕221號
各省、自治區、直轄市及新疆生產建設兵團應對新冠肺炎疫情聯防聯控機制（領導小組、指揮部）：
為科學規範指導開展農貿（集貿）市場新冠病毒環境監測工作，深入開展病毒溯源和疫情防控，我們組織編制了《農貿（集貿）市場新型冠狀病毒環境監測技術規範》。現印發給你們，請參照執行。
國務院應對新型冠狀病毒肺炎
疫情聯防聯控機制綜合組
（代章）
2020年7月30日
（信息公開形式：主動公開）
農貿（集貿）市場新型冠狀病毒環境監測
技術規範
農貿（集貿）市場是新冠肺炎疫情防控的重點場所，加強對農貿（集貿）市場新冠病毒環境監測，對於深入開展病毒溯源和疫情防控意義重大。為科學規範指導開展農貿（集貿）市場新冠病毒環境監測工作，特製定本技術規範。
一、監測對象
監測重點為具備區域輻射能力的大型農貿（集貿）市場，特別是包括冷凍、冷藏功能的肉類和海鮮水產交易攤位，或者存在潮濕、密閉空間的市場。
二、監測內容
（一）市場內重點攤位的設施、用具表面病毒檢測。重點對攤位檯面、面板、地面、把手，以及各種製作和使用器具等表面，包括脫毛或切割機械、刀具等，採集拭子樣本。
（二）市場內重點攤位從業人員咽拭子、衣物表面、手部病毒檢測。對處於工作狀態的從業人員手部表面，採集拭子樣本。
（三）市場內重點攤位存放食品的冰箱、冷藏櫃內部表面病毒檢測。對儲藏食物過程中經常觸及的冰箱、冷藏櫃內表面，採集拭子樣本。
（四）市場內銷售的肉、禽類和海鮮水產類食品的病毒檢測。對市場內銷售的食品應當按照無包裝食品和有包裝食品加以區分，其中有包裝類食品重點是需要冷藏運輸的肉、禽類和海鮮水產類食品，採集拭子樣本。
（五）市場內排水系統中污水的病毒檢測。重點包括市場內海鮮水產、肉禽類產品攤位來源的污水，採集拭子樣本或污水樣本。
（六）市場內公共空間中人員接觸較多的部位，包括主要進出口的電梯按鈕、樓梯扶手、門把手錶面，茶水間、衛生間等公用設備設施表面，潮濕的公共通道和衛生間地面、墩布池等採集拭子樣本。
（七）市場內經常性跨區域移動的工具或物品，包括垃圾車、垃圾桶、墩布等清潔工具，轉運物品的拖車等，採集拭子樣本。
（八）市場內工作人員聚集、通風不良的環境，包括辦公室、工具間、休息間、局部交易環境等環境拭子及氣溶膠樣本。
三、樣本採樣
（一）樣本要求。
1.從業人員咽拭子、手部、衣物和其他物體表面拭子樣本：要求用病毒採樣管中的病毒保存液，充分浸潤採樣棉籤後，對擬採集的手部或物體（包括公共通道的地面）的表面重複塗抹、涮洗3次以上。同時要滿足對採樣對象表面，進行多點分佈式採樣。
2.食品表面拭子樣本：食品樣本不可直接進行採集，應當首先將擬採集的食品小心分離，並存放於潔淨採樣袋後，再進行拭子樣本的採集。要求用病毒採樣管中的病毒保存液，充分浸潤採樣棉籤後，對擬採集食物樣本的表面重複塗抹、涮洗3次以上。同時要滿足對樣本表面，進行多點分佈式採樣。
3.污水樣本：按照市場內排水系統分佈情況，選取2-3處污水採樣位置，重點為內部管網匯集處、水流方向的下游或與市政管網的連接處。採集拭子樣本要求，用採樣棉籤浸入污水中，使其吸附污水並在採樣管中對涮洗3次以上。採集污水樣本要求，用聚乙烯塑料瓶收集30-500mL污水水樣；大於500mL體積的污水採集可以使用聚乙烯塑料桶或現場水樣專用富集設備。同時要滿足對污水採樣位置，進行多點分佈式採樣。
4.動物樣本：對於活體動物，可分別用採樣棉籤採集其體表拭子、口咽拭子和肛拭子，也可以採集其排泄物或分泌物樣本，並在記錄單上進行相應記錄。對於以經過剝皮等處理的動物樣本，分別用棉籤採集其體表和體腔拭子樣本，要求用病毒採樣管中的病毒保存液，充分浸潤採樣棉籤後，對擬採集食物樣本的表面重複塗抹、涮洗3次以上。同時要滿足對樣本表面，進行多點分佈式採樣。
5.其他器具：籠具或魚缸等裝運、養殖動物的容器，需首先觀察或了解該容器具體存放、養殖過的動物類型，採集容器內壁拭子樣本或內容物液體樣本。
6.人員聚集、通風不良的局部交易區域、辦公室、休息間等環境採集氣溶膠樣本。
（二）採樣方法。
1.採樣週期：對重點大型集貿市場（特別是銷售生鮮類產品的市場）按照1次/週，對其餘需要監測的集貿市場按照1次/月的頻次進行病毒監測。
2.採樣實施：現場採樣由兩名以上的工作人員參與完成，採樣時應當穿戴防護服、防護口罩、鞋套和醫用一次性手套。採樣過程需開啟現場採樣視頻記錄設備。
3.採樣裝備：病毒採樣箱、病毒採樣管、氣溶膠採集器、樣品記錄單、手消設備、潔淨採樣袋、冰袋、高危險生物樣本轉運箱和生物安全垃圾袋等。
4.採樣記錄：樣本信息應當包括樣本採集的採樣時間、地點、集貿市場名稱、攤位編號、採樣類型、樣本編號以及採樣人等信息。
5.採樣操作：採樣開始前，要求穿戴防護服、口罩、鞋套和手套等個人防護用品進入採樣現場，並使用手消進行手部消毒。拭子樣本採樣過程中，採樣棉籤只能接觸當前採集的樣本，避免觸碰到其他物體。污水樣本採集前，先充分攪勻，然後取樣。污水分三層以上，不能攪勻時，可按各層量的多少的比例分層取樣。氣溶膠樣本採集使用氣溶膠採集器，設定採集高度、空氣通量和採集時間，進行氣溶膠採集，將採集後的吸收液或濾膜放置在特定的低溫容器進行轉運。採樣結束後，清理廢棄物後離場。
6.樣品轉運：採集樣品連同採樣記錄單應當在24小時內運送至當地指定的病毒監測機構進行檢測，樣本建議冷藏存放於高危險生物樣本轉運箱中，並由專人、專車進行轉運。
四、檢測
（一）樣本分裝和保存。
1.樣本分裝：標本採集後應當在生物安全二級實驗室生物安全櫃內分裝，但個人防護裝備參照生物安全三級實驗室的防護要求。所有採集對環境標本應當分裝到大小適合的帶螺旋蓋內有墊圈、耐冷凍的樣本採集管裡，按照1000ul/管進行分裝。容器(採集管)外註明樣本編號、種類及採樣日期。用於後續核酸提取和病毒分離等實驗室檢測工作。
2.樣本保存：用於病毒分離和核酸檢測的標本應當盡快進行檢測，能在24小時內檢測的標本可置於4℃保存；24小時內無法檢測的標本則應當置於-70℃或以下保存（如無-70℃保存條件，則於-20℃冰箱暫存）。
（二）污水水樣前期處理。使用離心技術去除污水中雜質。先打開低溫離心機，待溫度降至4℃左右，建議4654離心力離心30分鐘，取上清。再使用膜吸附技術或超濾技術進行上清液的濃縮。
（三）核酸提取。新型冠狀病毒的常規檢測方法是通過實時熒光RT-PCR鑑定。任何新型冠狀病毒的檢測都必須由經過相關生物安全及技能培訓的人員進行操作。對已經滅活的樣本，應當在生物安全二級（BSL-2）實驗室內，使用自動化核酸提取儀，配套核酸提取試劑盒進行病毒核酸的提取。核酸提取後，應當將核酸產物進行分裝，用於後續核酸實時熒光定量（RT-PCR）及深度測序。核酸提取操作參考相關廠家試劑盒說明書開展。
（四）實時熒光定量PCR。在BSL-2實驗室中對所有已提取的核酸樣本，應當用經CFDA批准的RT-PCR診斷試劑進行新型冠狀病毒核酸檢測，以保證實驗結果的正確可靠。RT-PCR反應體系和操作參考相關廠家試劑盒說明。每一次RT-PCR反應均應當設置陰性對照、陽性對照和無模板空白對照，以確保擴增體系工作正常。
五、實驗室生物安全
實驗室安全級別參照最新版《新型冠狀病毒實驗室生物安全指南（第二版）》的相關內容進行管理。採集的環境樣本屬於未經培養的感染性材料，在採用可靠的方法滅活前進行的病毒抗原檢測、血清學檢測、核酸提取、生化分析，以及臨床樣本的滅活等操作，應當在生物安全二級實驗室進行，同時採用生物安全三級實驗室的個人防護。環境樣本在採用可靠的方法滅活後進行的核酸檢測、抗原檢測、血清學檢測、生化分析等操作應當在生物安全二級實驗室進行。
附表：新型冠狀病毒環境檢測標本送檢表
附表
新型冠狀病毒環境檢測標本送檢表
市場名稱： 送樣單位（蓋章）： 送樣日期： 年 月 日送樣人：
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序號 |
採樣日期 |
樣本編號 |
採樣類型 |
樣本名稱備註 |
檢測日期 |
實時熒光RT-PCR |
備註 |
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攤位號 |
樣本名稱（拼音首字母） |
試劑廠家 |
靶基因1 |
靶基因2 |
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樣本名稱：可以用拼音首字母表示，如冰箱用BX表示；樣本類型包括：物體表面、手部表面、食品樣本；樣本名稱備註：對拼音首字母進行註釋說明，如BX備註為冰箱
